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如何选择合适的pall离心(浓缩)管?
点击次数:192 发布时间:2019-04-17

(1)选择合适的超滤管。通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量为35kDa,就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。若目的蛋白分子量为10kD左右,则可以用截留分子量3kD的超滤管。认真阅读使用说明书,注意超滤膜对各种化学物质的耐受程度有所不同。

(2)新买来的超滤是干燥的,使用前加入超纯水,水量完全过膜,冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超过管顶的白线为准。操作要轻,加入蛋白液前,超滤管需要插在冰上预冷。

(3)平衡。质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快,否则直接损坏超滤膜。开始离心超滤(离心机预冷至4度)。不同离心机的转速 rpm换算成g之后,有所不同。离心机的加速度调至zui低档,减小对膜的压力。注意,一定要等离心机达到目的转速之后,方可离开离心机,否则离心机出问题时,无法*时间处理。膜与转轴的方向根据说明书调整(角转离心机的情况是膜与轴垂直)。在实际使用中,一般转速开的比说明书里的要低,这样可以延长离心管的使用寿命。

(4)当浓缩到剩下1ml时,取50ul缓冲溶液,加入10ul流穿,看有没变蓝色,以此判断超滤管是否漏掉蛋白。如果管漏了,将上层和流穿重新倒入新管中开始超滤。要精确判断是否漏管,用5mgml的BSA离心10min,再取流穿,跑蛋白胶或Bradford粗测,继续加入剩下的蛋白液浓缩(在冰上操作,防止蛋白受热),直到所有浓缩液都加完为止。离心过程中注意是否发生蛋白沉淀,导致堵管。若发生沉淀,要确定沉淀的具体原因,是蛋白浓度过高还是Buffer不合适;前者可用多根超滤管同时超滤,降低浓度的办法解决,后者的方法是换不同的缓冲溶液,直到蛋白不发生沉淀为止。

(5)前面几步用以浓缩蛋白,如果要换Buffer,在总蛋白液浓缩至1ml左右的时候,轻轻加入新的Buffer(经0.22um超滤膜超滤),再 浓缩至1ml左右,连续三次,zui后一次的浓缩终体积根据需要的蛋白浓度而定,一般不多于500ul,也有浓缩至200ul以内的情况。按照每次至少10倍左右的体积浓缩算,三次达到1000倍以上,基本上可以达到换buffer的目的。

离心浓缩管

pall离心浓缩管可以有效简化核酸与蛋白的常规处理程序。只需几分钟,这些离心管就可以对从50ul60ml的样品进行高效的浓缩和脱盐。它可选配多种膜,确保低非特异性生物分子吸附和稳定的高回收率,回收率通常超过90%

1、三种常用的应用:

浓缩——采用超滤的方法浓缩稀释的蛋白或DNA/RNA样品溶液是十分便捷的

脱盐和缓冲液交换(洗滤)——超滤为去除和更好溶液中的盐、去除变性剂、分离复合分子、去除低分子量物质或者快速改变离子或者pH环境提供了方便而高效的方法。

分离-超滤无法完全分离两种分子量近似的分子。为有效分离,被分离分子的分子量差别至少要达到一个数量级(10X)。使用超滤进行分离非常高效,比如制备无蛋白的滤液,从DNA和蛋白样品上分离游离状态或者未混合的标记物,纯化PCR合成反应的产品。

2、与非膜工艺(层析、透析、溶剂萃取或者离心)相比,超滤具有以下优点:

对于被处理的分子更加温和

不需要有机萃取,也就不会导致蛋白变性

维持了离子和pH条件

更快,更便宜

可以在低温下进行处理(比如在冷藏室中)

高效,可以同时对分子进行浓缩和纯化

  

3、基于不同处理量的产品的选型

产品

样品体积

AcroPrepTM384滤板

<100uL

AcroPrep Advance滤板

<1mL

Nanosep®离心浓缩管

<0.5mL

MicrosepTM Advance离心浓缩管

0。5-5mL

Macrosep ®Advance离心浓缩管

5-10mL

JumbosepTM离心浓缩管

20-60mL

 

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